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作者 胡拥军1 宋玲1 张霁霁2 ( 1． 湖北省妇幼保健院药剂科 武汉 430070; 2． 荆州市第一人民医院) 来源中国药师 2017 年第 20 卷第 11 期 1942-1944
摘要目的: 对伏立康唑磺丁基醚-β-环糊精包合物( VCZ-SBE) 滴眼液对兔真菌性角膜炎的治疗作用进行考察。 方法: 采用烟曲霉菌建造家兔真菌性角膜炎( FK) 模型。48只健康家兔，随机分为 4 组。A 组 12 只右眼接种烟曲霉菌，不做任何治疗;B组12只右眼接种烟曲霉菌成功后当天开始滴用0.5% VCZ-SBE 滴眼液; C 组12只右眼接种烟曲霉菌成功后当天开始滴用1.0% VCZ-SBE 滴眼液; D组12只右眼接种烟曲霉菌成功后当天开始滴用0.5% 氟康唑滴眼液。随机取以上各组家兔健康左眼角膜作为空白对照。各组建模成功后当天及第 1，4，7，14 天进行溃疡评分，并于第 1，4，7，14 天各组处死 3 只家兔，取其角膜，观察炎症细胞浸润程度及真菌菌丝侵入深度。 结果: 各组兔右眼烟曲霉菌接种成功后溃疡评分差异无统计学意义( P ＞0． 05) 。B 组于治疗后的第 7 天溃疡评分明显低于 A 组( P＜0.05) ，C 组于治疗后的第 4 天溃疡评分明显低于 A 组( P＜0.05) ，D组于治疗后的第14 天溃疡评分明显低于 A 组( P＜0.05) 。在治疗后的第4、7、14 天，C 组的溃疡评分、炎症浸润深度及坏死程度均明显低于 B、D 组( P＜0.05) ，而 B 组在治疗后的第 7，14 天的以上指标明显低于 D 组( P＜0.05) 。 结论: 与同浓度的氟康唑滴眼液相比，VCZ-SBE 包合物滴眼液可更好地降低真菌性角膜炎的溃疡评分，降低浸润深度，且随着浓度的增加，药效增强。 关键词伏立康唑; 磺丁基醚-β-环糊精; 包合物; 滴眼液; 真菌性角膜炎; 氟康唑 中图分类号Ｒ965． 1 文献标识码A 文章编号1008-049X( 2017) 11-1942-03
真菌性角膜炎( fungal keratitis，FK) 为临床常见的严重感染性角膜疾病，可直接危害患者视力。对 FK 患者给予早期有效的药物治疗，可控制症状，避免感染造成的进一步危害。伏立康唑( voriconazole，VCZ)为氟康唑的衍生物，具有抗菌谱广、抗菌效力强、良好的角膜渗透性等特点，可用于氟康唑治疗失败的浅中层真菌性角膜溃疡[1] 。针对 VCZ水溶性差的问题，前期研究利用磺丁基醚-β-环糊精( sulfonated butyl ether- β-cyclodextrin，SBE-β-CD)包合 VCZ，显著增加了 VCZ 的溶解度[2] ，并制备成该包合物滴眼液，进行了体外质量考察。 本部分拟用烟曲霉菌建立家兔 FK 模型，以氟康唑滴眼液为对照，研究伏立康唑磺丁基醚-β-环糊精包合物滴眼液( VCZ-SBE) 的体内药效，以期为该滴眼液用于治疗 FK 的疗效提供实验依据。 1 材料与方法 1.1 仪器
TG 328A 电子分析天平( 上海天平仪器厂) ;HJ-3 恒温磁力搅拌器( 江苏省金坛市医疗仪器厂) ;JB-CJ-1000FX 单人单面垂直流无菌操作台( 苏州佳宝净化工程设备有限公司) ; Alpha-4 冷冻干燥机( 德国 Martin Christ) ; 裂隙灯 YZ-5C( 苏州康捷医疗器械有限公司) 。
1.2 试药
VCZ( 万特制药有限公司，批号: 160222，含量:99． 85% ) ; SBE-β-CD( 淄博千汇生物科技有限公司，批号: 160118) ; 氯化钠( 天津亚太龙兴化工有限公司，批号: 20160221) ; 苯扎溴铵( 湖北兴银河化工有限公司，批号: 20160111) ; 烟曲霉菌株( 中国科学院微生物研究所选育并保藏，编号: 3.5835) ; 0.5% 氟康唑滴眼液( 永光制药有限公司，规格: 5 ml，批号:20160208) 。
1.3 动物
大耳白家兔，雄性，体质量1.5 ～ 2.0 kg，由武汉生物制品研究所提供，动物质量合格证号: SCXK( 鄂) 2008-0003( 00015754) 。
1.4 方法1. 4. 1 VCZ-SBE 滴眼液的制备 VCZ与SBE-βCD的摩尔比为1∶1,在室温下将VCZ用少量95%乙醇溶解,另用纯水溶解SBE-β-CD,在搅拌下将VCZ 溶液滴加到 SBE-β-CD 溶液中,加完后继续搅拌 4 h,收集沉淀,冷冻干燥; VCZ SBE-β-CD包合物20 g,氯化钠3. 6 g,苯扎溴铵 5% ,注射用水加至1000ml,严格无菌操作｡将处方量各物质加入至800 ml 注射用水中,搅拌溶解,用0. 1 mol·L-1盐酸调pH至6. 0 ~ 7. 0,补足注射用水,搅拌均匀后,用0. 45 μm的微孔滤膜过滤,分装于5 ml滴眼液瓶中即得1. 0% VCZ-SBE 滴眼液｡ 将 VCZ SBE-β-CD 包合物的用量改为 10 g,同法制备0. 5% VCZ-SBE 滴眼液｡ 1. 4. 2动物分组及处置 48只健康家兔,随机分为4组｡各组家兔右眼采用改良角膜表面镜片术法接种烟曲霉菌,并进行接种成功与否的评判[3],结果各组均在3d后接种成功｡A组12只右眼不做任何治疗; B组12只右眼接种成功后当天开始滴用0. 5% VCZ-SBE 滴眼液; C组12只右眼接种成功后当天开始滴用1. 0% VCZ-SBE 滴眼液; D组12只右眼接种成功后当天开始滴用0. 5% 氟康唑滴眼液｡随机取以上各组家兔健康左眼角膜作为空白对照｡ 1. 4. 3 角膜炎症病理评分 各组在接种成功后的当天及第 1,4,7,14天进行角膜炎症观察,根据角膜溃疡面积､混浊程度及前房反应等对兔眼的病理改变进行评分,以3个分数的加和为病理总分[4]｡ 1. 4. 4 HE 染色角膜标本制作及观察 各组分别于第 1,4,7,14天用耳缘静脉空气栓塞法处死3只家兔,取其完整角膜,用无菌生理盐水漂洗干净,于病灶中央取样用10%甲醛固定,HE 染色后于显微镜下观察炎症细胞浸润程度及真菌菌丝侵入深度,并以正常兔眼角膜作对照｡
1.5 统计学方法采用 SPSS20． 0 统计学软件处理数据，数据均以  表示，各组样本符合正态分布及方差齐性，采用完全随机设计的方差分析进行统计分析，组间两两比较采用 LSD 检验，以 P ＜ 0． 05判断差异有统计学意义。 造模成功当天及相应天数后的结果见图 1 和表1｡各组在造模当天均可见结膜充血水肿,呈现明显的角膜灰白色混浊,溃疡评分差异无统计学意义( P> 0. 05) ; A 组至 14 d 时,角膜覆盖白色浓厚致密坏死物,而 B､C､D 组分别于治疗后的第 7,4,14 天病灶炎症明显消退,溃疡评分明显低于 A 组 ( P <0. 05) ,C 组在治疗后的第 4 d 评分明显低于 B､D 组( P < 0. 05) ,B 组在第7 d 的评分明显低于 D 组( P< 0. 05) ｡   2.2 HE 染色观察结果
正常角膜、A 组及 D 组造模第 14 d、B 组造模第7 d、C 组造模第 4 d 的结果见图 2，可见正常角膜上皮细胞规整，胶原纤维中有角膜基质细胞，没有炎症细胞; A 组造模第 14 d 角膜几乎全部坏死，且无正常板层结构; B 组造模第 7 d 溃疡明显愈合，只有少量炎性细胞，并可见新生血管官腔; C 组造模第 4 d情况与 B 组造模第 7 d 相似; D 组造模第 14 d 基质层仍有炎症细胞，但板层结构完整。
 3 讨论 FK 的致病菌多达 100 余种,而镰孢菌属和曲霉属引起的 FK 约占 75% 左右[5],且曲霉菌感染的 FK临床较难治疗｡故本实验选用烟曲霉菌,采用角膜接触经法成功建立了兔眼 FK 模型｡ 氟康唑为目前临床上使用的主要抗真菌药物,易穿透角膜,对真菌有明显的杀灭作用,但其耐药性比率较高[1],往往造成 FK 治疗的失败而转而手术治疗｡VCZ 为氟康唑的衍生物,具有对真菌敏感度高,良好的眼部通透性及较少的不良反应等特性,是治疗眼部真菌感染的较优选择｡本研究的结果显示,与同浓度氟康唑滴眼液相比,VCZ SBE-β-CD 包合物滴眼液可在更短的时间内控制 FK 的发展,起到较好的治疗作用,且其疗效随着浓度的增加得以进一步增强｡VCZ 水溶性较差,而本实验利用包合物技术较好地解决了 VCZ 滴眼液浓度较低､需要使用较多增溶剂等缺憾,为 VCZ 在眼部的应用奠定了实验基础｡  [参考文献] 1 魏书宏，李素霞，赵倩，等． 伏立康唑治疗浅中层真菌性角膜溃疡的疗效观察［J］． 临床眼科杂志，2014，22( 2) : 152-154 2 闫智慧，张霁霁，胡拥军，等． 磺丁基醚-β-环糊精及羟丙基-β-环糊精对伏立康唑的增溶作用比较［J］． 中国药师，2017，20 ( 7) : 1296-1298 3 刘廷，徐园园，陈豪，等． 改良角膜表面镜片术法建立兔曲霉菌性角膜炎动物模型［J］． 中华实验眼科杂志，2011，29( 2) : 101-106 4 Wu TG，Wilhelmus KＲ，Mitchell BM． Experimental keratomycosis in a mouse model ［J］． Invest Ophthalmol Vis Sci，2003，44 ( 1) :210-216 5 Xie L，Zhai H，Zhao J，et al． Antifungal susceptibility for common pathogens of fungal keratitis in Shandong province China ［J］． Am J Ophthalmol，2008，146( 2) : 260-265.
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发表于 2023-4-10 09:01:33
