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2011年中国侵袭性假丝酵母种类及药物敏感性监测

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发表于 2022-7-12 08:48:52 | 显示全部楼层 |阅读模式
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  近年来,非白假丝酵母种感染率有所上升,但白 假丝酵母仍然是引起侵袭性假丝酵母病的主要病 原体[1]。

  由于不同地区病原流行病学具有一定差异,了 解当地流行病学数据非常重要[2]。因此,准确鉴定 假丝酵母类型,测定其抗真菌药敏谱,建立监测数据 网,对指导临床决策至关重要[3]。抗真菌耐药性监 测 项 目,如 ARTEMIS 全 球 抗 真 菌 监 测 计 划 (1997—2007年),在监测致病酵母菌的致病菌种类 和对抗真菌药物的敏感性方面发挥了重要作用[4]。 而中国侵袭性酵母菌感染的流行病学数据局限于单 中心的研究,且酵母菌种数量很有限。为了解决这 些缺陷,2009年7月启动了全国医院侵袭性真菌监 测网 (Chinahospitalinvasivefungalsurveillance net,CHIF-NET)的多中心研究,监测酵母菌感染的 流行病学趋势,并提供最新的抗真菌药物敏感性数 据。在此本研究报告了第二监测年的研究结果,重 点研究了假丝酵母对氟康唑和伏立康唑的体外敏 感性。

1 资料与方法
1.1 资料
  本研究是一项回顾性、基于实验室的多 中心研究。收集了全国24家三甲医院2010年8月 -2011年7月临床分离的侵袭性感染酵母菌。本 研究已由医院伦理委员会审批通过(S-263)。
  纳入标准:本研究所有侵袭性假丝酵母均分离 自血液、体液(包括腹水和腹膜透析液、脓液、关节积 水和脑脊液等)、假丝酵母感染患者的组织、支气管 肺泡灌洗液、中心静脉导管和胃肠道(如胃液)。排除标准:来自尿液和生殖道的假丝酵母以及其他被认为是定植的菌株被排除在外。来自同一患者同一分离部位的,在不同时间点分离到的菌株,被认为是重复菌株,也被排除在外。

  所有分离菌株以及初步鉴定结果送往中心实验 室(北京协和医院检验科)进行统一鉴定。

1.2 方法
1.2.1 菌株鉴定
  分离菌株送至中心实验室,统一 用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(法国生物 梅里埃公司)进行鉴定,未鉴定出的菌株用引物对内 转录间隔区 (Internaltranscribedspacer1/Internal transcribedspacer,ITS)1/4扩增真菌ITS[5],从而 鉴定到种水平。初步鉴定与最终鉴定(质谱或分子 鉴定)结果的一致性评价如下:当初始鉴定正确的将分离株鉴定到属,但无法精确到种,或初始鉴定为某个种的复合体时,认为鉴定出现小错误[6-7]。当初始 鉴定与最终鉴定结果不同种时,定义为重大错误。

1.2.2 药敏试验
  用美国临床和实验室标准协会 (Clinicalandlaboratorystandardsinstitute,CLSI) M44-A2文件中的纸片扩散法测定氟康唑和伏立康 唑的敏感性[8]。根据 CLSI菌种特异性折点对药敏 结果进行判定[8]。光滑假丝酵母对于伏立康唑的敏 感性根据流行病学折点进行判定[9-10]。

1.3 统计分析
统计分析由 SPSS12.0软件完成, 计数资料采用例数或百分比表示。本研究中 Wilc- oxon符号秩和检验来进行离散型数据比 较,P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结 果
2.1 监测医院
  涵盖15个城市,包括杭州的4所 医院,北京3所,广州、沈阳、上海和哈尔滨各2所, 重庆、长沙、天津、成都、济南、南京、武汉、福州和西 安各1所,总共收集了1407株假丝酵母。

2.2 研究菌株
  白假丝酵母是最常见的菌种,从血 流中分离得到假丝酵母最多。见表1。


2.3 科室分布
  所收集的菌株中,91.4%来自于住 院患者,ICU 分离到菌株最多。见表2。


2.4 药敏 实 验
  绝 大 部 分 (>92.50%)白 假 丝 酵 母、近平滑假丝酵母复合体、热带假丝酵母对氟康唑伏立康唑敏感。见表3。


3 讨 论
  通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱和分 子测序方法来准确鉴定假丝酵母株对于本次研究是 至关重要的[5,11]。虽然初始鉴定与最终鉴定的总体符合率 较 高,但 重 大 错 误 率 相 对 也 偏 高 (11% ~ 100%),包括克柔假丝酵母、葡萄牙假丝酵母和其他少见假丝酵母种。因为有些假丝酵母种在显色平板 上的颜色区分并不是很明显,表型鉴定系统的数据 库的限制,特别是对于不常见的假丝酵母种,鉴定能 力有限。尤其是近平滑假丝酵母复合体,利用质谱 技术很难将拟平滑假丝酵母和似平滑假丝酵母区分 开来[12]。本研究中,分子方法将近平滑假丝酵母复 合体成功区分开[6,13],尽管在本研究中使用了分子 鉴定方法,但是由于较高的成本和缺乏标准化方法 和质量控制程序,在中国大多数临床微生物学实验 室中仍未得到广泛推广。因此像 CHIF-NET 等监 测网提供这些数据是非常重要的。

  侵袭性假丝酵母病是最常见的一种真菌感染, 白假丝酵母是其中最常见的一种病原,对其长期监 测非常有必要[14]。其他假丝酵母种占比也很高,包 括19.05%的热带假丝酵母和15.21%的近平滑假丝 酵母复合体。然而,在近期研究中(不包括 ARTE- MIS研究),排除了痰液、尿液和生殖道标本,白假丝 酵母仍然是从这些标本中分离出来最常见的假丝酵 母菌种[15]。在以往的研究中,假丝酵母多分离自呼 吸科[16-17],本研究排除了痰液标本后,ICU 成为了分 离率最高的科室。

  血液病患者合并侵袭性真菌病致死率高,提高 真菌鉴定效率非常有必要[18-19]。在血标本中,近平 滑假丝酵母复合体的分离率(21.51%;128/595)仅 次于白假丝酵母。对于近平滑假丝酵母复合体在中 国的高发病率还没有很好的解释。近平滑假丝酵母 复合体与导管相关性真菌血症有关,会定植在皮肤 上[20]。中央静脉导管的护理和感染控制可能有助于 鉴定近平滑假丝酵母症的危险因素。光滑假丝酵母 分离率(11.02%)少于美国(24%~25%)[11,21],但比 拉丁 美 洲 和 欧 洲 的 某 些 地 区 更 普 遍 (3% ~ 8%)[22-23]。很少有调查研究非血流感染中的致病假 丝酵母。本次研究为中国医生提供了相关的临床数 据,白假丝酵母分离率最高占48.61%,热带假丝酵 母次之占19.05%,近平滑复合体和光滑假丝酵母分 别占15.21%和11.02%。总体来说,大部分假丝酵 母对两种唑类药物敏感,对唑类耐药的白假丝酵母、 近平滑假丝酵母和热带假丝酵母非常少(<5%)。 其中14株对氟康唑耐药的近平滑假丝酵母种,有9 株来自解放军总医院,有8株分离自ICU 患者。有 着非常明显地域差异。光滑假丝酵母对两种唑类的 耐药率较高,在近期研究中的光滑假丝酵母对唑类 的敏感性普遍偏低[24],也有学者通过基因分型的手 段来研究光滑假丝酵母,进一步探讨了其对唑类药 物的高耐药率[2,25]。

  总之,本研究为我国侵袭性假丝酵母感染的流行病学研究提供了有用的临床资料。质谱和分子方 法对于鉴定不常见假丝酵母非常有效。氟康唑和伏 立康唑对白假丝酵母、近平滑假丝酵母复合体和热 带假丝酵母都有很好的抑制性,但对光滑假丝酵母 没有明显的抑制作用,光滑假丝酵母和一些少见假 丝酵母种都存在对该两种药交叉耐药的情况。还需持续监测。

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